一、实验目的

　　掌握人类外周血细胞培养方法及染色体标本的制备方法。观察人类染色体的形态和数目。

　　二、实验原理

　　血液中的T淋巴细胞在体外培养中经一定剂量的植物血凝素（PHA）刺激，可以返幼进行细胞分裂，红外线灭菌器价格用秋水仙素积累分裂相，用0.075mol/L-1KCI进行低渗后，经固定、染色，可见到分散的染色体。

　　三、实验准备

　　超净工作台、红外线灭菌器（艾本森仪器公司）、无菌注射器（1ml、2ml、5m1）、针头、培养瓶、橡皮塞、75％酒精棉球、离心机、定时钟、试管架、量筒、刻度离心管、冰凉玻片，毛细滴管、恒温水浴锅、RPMI1640、小牛血清、肝素、秋水仙素、植物血凝素（PHA）、固定液（甲醇：冰乙酸为3∶1，现用现配）、0.075mol。L-1KCI低渗液、Giemsa染液、pH6.8磷酸缓冲液、恒温培养箱、吹风机、粗天平、5％NaHCO3、显微镜。

　　四、实验方法与步骤

　　（一）接种

　　取500单位/lml的肝素0。2ml湿润针筒后，取静脉血1～2ml，转动针筒以混匀肝素；随后立即插入灭菌小瓶内，送入超净工作台（消毒、灭菌等略），在红外线灭菌器旁将血液滴入2～3个盛有5ml培养液（4mlRPMIl640、lml小牛血清，5mgPHA，用5％的NaHCO3调pH至7.0～7.4）的培养瓶内红外线灭菌器价格，每瓶0.2～0.3ml（7号针头13滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。

　　（二）培养

　　1．将培养瓶放在37℃恒温箱内培养72h。

　　2．在终止培养前2～4h，将0.01％的秋水仙素1～2滴（7号针头）加入培养瓶内，轻轻摇匀．放回温箱内，继续培养2～4h。

　　（三）收获

　　1．用吸管充分吹打瓶壁，吸取培养物移入刻度离心管内，相对离心管平衡后放入离心机，离心8min（1000转/分），吸去上清液，留下沉淀物。

　　2．低渗处理：加8ml预温（370C）的0.075mol。L-1KCI低渗液，用吸管打匀使细胞悬

　　浮于低渗液中，放回37℃恒温水浴锅中，静置15～20min，使白细胞膨胀，染色体分散。