红外线灭菌器价格是人类染色体标本的制备好帮手

一、实验目的

  

  掌握人类外周血细胞培养方法及染色体标本的制备方法。观察人类染色体的形态和数目。

  

  二、实验原理

  

  血液中的T淋巴细胞在体外培养中经一定剂量的植物血凝素(PHA)刺激,可以返幼进行细胞分裂,红外线灭菌器价格用秋水仙素积累分裂相,用0.075mol/L-1KCI进行低渗后,经固定、染色,可见到分散的染色体。

  

  三、实验准备

  

  超净工作台、红外线灭菌器(艾本森仪器公司)、无菌注射器(1ml、2ml、5m1)、针头、培养瓶、橡皮塞、75%酒精棉球、离心机、定时钟、试管架、量筒、刻度离心管、冰凉玻片,毛细滴管、恒温水浴锅、RPMI1640、小牛血清、肝素、秋水仙素、植物血凝素(PHA)、固定液(甲醇:冰乙酸为3∶1,现用现配)、0.075mol。L-1KCI低渗液、Giemsa染液、pH6.8磷酸缓冲液、恒温培养箱、吹风机、粗天平、5%NaHCO3、显微镜。

  

  四、实验方法与步骤

  

  (一)接种

  

  取500单位/lml的肝素0。2ml湿润针筒后,取静脉血1~2ml,转动针筒以混匀肝素;随后立即插入灭菌小瓶内,送入超净工作台(消毒、灭菌等略),在红外线灭菌器旁将血液滴入2~3个盛有5ml培养液(4mlRPMIl640、lml小牛血清,5mgPHA,用5%的NaHCO3调pH至7.0~7.4)的培养瓶内红外线灭菌器价格,每瓶0.2~0.3ml(7号针头13滴),盖上橡皮塞,轻轻摇动以混匀。

  

  (二)培养

  

  1.将培养瓶放在37℃恒温箱内培养72h。

  

  2.在终止培养前2~4h,将0.01%的秋水仙素1~2滴(7号针头)加入培养瓶内,轻轻摇匀.放回温箱内,继续培养2~4h。

  

  (三)收获

  

  1.用吸管充分吹打瓶壁,吸取培养物移入刻度离心管内,相对离心管平衡后放入离心机,离心8min(1000转/分),吸去上清液,留下沉淀物。

  

  2.低渗处理:加8ml预温(370C)的0.075mol。L-1KCI低渗液,用吸管打匀使细胞悬

  

  浮于低渗液中,放回37℃恒温水浴锅中,静置15~20min,使白细胞膨胀,染色体分散。


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